重组抗体是利用重组DNA技术在体外构建的单克隆抗体，不受免疫系统的限制。它克服了杂交瘤单克隆抗体的许多缺陷，成为研究的热点。目前，开发重组抗体的方法主要有三种：噬菌体展示筛选；已有杂交瘤细胞测序；直接B细胞克隆。开发的目的不仅是获得抗体，而且是测量抗体的基因序列，以便随后产生和转化抗体。

一、噬菌体展示技术

噬菌体展示技术是在噬菌体表面展示单链抗体或fab的抗体库制备技术。抗体库结合固相技术和高通量筛选，可以方便、快速地获得高亲和力的抗体，并对噬菌体进行测序，获得抗体序列。

噬菌体实验过程：

1、从小鼠B淋巴细胞中扩增全套抗体的轻链和重链基因，构建噬菌体载体，表达抗体；

2、数百万甚至数十亿的噬菌体显示抗体片段。每个噬菌体携带不同的抗体并建立抗体库；

3、固相或液相抗原与抗体库一起孵育，经过几轮“吸附-洗脱扩增”筛选出特异性抗体

4、筛选并分离出亲和力高、稳定性好的抗体，并进行噬菌体测序，获得抗体序列，从而完成重组抗体的研制。

二、杂交瘤细胞测序

对现有杂交瘤细胞进行测序也是快速获得抗体序列的方法之一。杂交瘤细胞染色体容易丢失，导致杂交瘤细胞对话。重新建造既费时又费力。通过测序，可以获得抗体基因序列，以便在任何时候长期保存和生产。

杂交瘤细胞测序过程：

1、通过race技术获得杂交瘤细胞和mRNA；

2、RT_PCR获得cDNA，通过PCR获得cDNA，并扩增抗体的轻链和重链基因；

3、将抗体基因连接到T载体上，选择阳性克隆；

4、通过测序获得抗体基因序列，并进行生物信息学分析。

三、B细胞克隆

B细胞克隆是开发重组抗体的另一种方法。噬菌体展示技术依靠在体外重组重链和轻链来产生和筛选体内未发现的抗体。而自连接的B细胞克隆保留了原始的重链和轻链抗体对。然而，B细胞克隆需要使用整个B细胞进行发育，从新分化的B细胞到完全分化的B细胞，而浆细胞仅占B细胞的0.1-1.0%。流式细胞术可筛选分泌特异性抗体的浆细胞。

B细胞克隆过程:

1、免疫动物，检测血清ELISA效价；

2、通过流式细胞术在一只免疫增强疾病动物中分离出单个浆细胞；

3、扩增细胞抗体轻链和重链基因序列，克隆到哺乳动物细胞表达载体中；

4、哺乳动物细胞表达抗体，用间接ELISA法筛选效价最佳的克隆；

5、对克隆质粒进行测序，获得抗体的基因序列。

一旦重组抗体的开发完成，就可以进行大规模生产，并且可以提供比杂交瘤抗体更可靠的活性。开发过程复杂、耗时且昂贵。传统的有限稀释法等方法需要多轮操作，结合多种方法寻找和确认单克隆抗体，事半功倍。Beacon可以直接培养目标细胞，你看到的就是你得到的，它可以确保每个纳米笔只有一个细胞，并自动移除可能的多个细胞，这样一轮Beacon就可以轻松实现99.5%的单克隆抗体。单克隆筛选从2-3个月缩短到5天，这大大节省了您的时间。

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